凡是能抑制酶活性但并不使酶变性的物质称为酶的抑制剂（I）。抑制剂作用可分为可逆性抑制与不可逆性抑制。

1.可逆性抑制　这种抑制是抑制剂与酶以非共价键结合而引起酶活性的降低或失活，除去抑制剂后，酶的活性又可恢复。包括竞争性抑制作用与非竞争性抑制作用两类。

（1）竞争性抑制作用　当抑制剂的化学结构与底物相似时，二者可相互竞争与酶活性中心的结合，但酶的活性中心不能同时既与抑制剂又与底物结合。当抑制剂与酶形成复合物（EI复合物）后，就减少了底物与酶的复合物（中间产物）浓度，反应速度因此下降。但若增加底物的浓度则可抵消或解除抑制剂的抑制作用。抑制作用的大小既取决于抑制剂浓度与底物浓度之比，也受二者与酶活性中心亲和力的影响。

（2）非竞争性抑制作用　非竞争性抑制剂与底物结构上并无相似之处，它可以结合到游离酶上，也可结合到酶与底物的复合物上，但都结合在活性中心之外的部分。抑制剂与酶结合后，也不妨碍再与底物结合。但所形成的酶、底物、抑制剂三元复合物（ESI复合物）不能进一步分解，酶分子不能再次发挥作用，从而使反应速度下降。其抑制作用的程度取决于抑制剂本身的浓度，其抑制作用也不能用增加底物浓度的方法消除，故称非竞争性抑制作用。

2.不可逆抑制

抑制剂与酶以共价键紧密结合，从而破坏了酶的催化功能或与底物的结合，使酶失去活性。这种抑制为不可逆的，即使抑制剂浓度很低，但只要比酶过量，即可达到完全抑制。这种抑制不能用透析等物理方法解除，只能采用相应解毒剂，通过化学反应与抑制剂结合，将抑制剂从复合物中取代出来，才可使酶恢复原有的结构。

（1）非专一性不可逆抑制　抑制剂与酶分子中的一类或几类必需基团进行共价结合，使酶失去活性。如重金属Hg2＋、Ag＋、Pb2＋、As2＋等化合物，能与酶的巯基进行不可逆共价结合，许多以巯基作为必需基团的酶会因此受到抑制。

（2）专一性不可逆抑制　抑制剂专一作用于某酶的活性中心或必需基团，进行共价结合从而抑制酶的活性。常见的有机磷农药有二异丙基氟磷酸（DFP）、敌百虫、杀螟松等，主要对胆碱酯酶有强烈抑制作用。当胆碱酯酶活性中心的丝氨酸残基被其磷酰化后，酶的活性即被抑制。此时胆碱能神经末梢分泌的乙酰胆碱不能及时分解，过多的乙酰胆碱会导致一系列胆碱能神经过度兴奋的症状。解磷定（2-PAM-I）和氯磷定（2-PAM-Cl）等药物分子中含有肟基（-CH=NOH），可与有机磷杀虫剂结合，使酶和有机磷杀虫剂分离而复活。